方法库 / NB/SH/T 0860-2013

NB/SH/T 0860-2013 液体燃料中活细菌和真菌计数的试验方法过滤和培养程序

2013暂时没上架dest 扫描。已回看封面/前言、范围 p003、仪器/试剂 p006–p007

发布 / 实施: 国家能源局 2013-06-08 发布 / 2013-10-01 实施（封面页）
证据等级: dest 扫描。已回看封面/前言、范围 p003、仪器/试剂 p006–p007、过滤/培养 p008–p009、计算/精密度 p010（learn_peek2/NBSHT-0860-2013）。公式 OCR 写成「90×1000」，按文面变量应为 N = CC×1000/V，标扫描待对照。

适用范围

分液漏斗玻璃 500 mL。量筒 100 mL 和 1 L。移液器 10 mL（玻璃或预消毒塑料）。
过滤膜：纤维素混合酯，预消毒，优先网格，直径 47 mm，孔径 0.45 μm（材料可按燃料改）。另备 0.2 μm 滤膜（醋酸/硝酸纤维素或聚碳酸酯）用于试剂除菌。
过滤器二选一：预消毒注射器滤器（方法 A）；或玻璃/不锈钢/聚丙烯预消毒滤器组件（方法 B，真空不超过 −66 kPa）。
平头镊子、抽滤瓶、培养皿直径 ≥50 mm（可用预倒平板）。
培养箱：25℃ ±2℃，并可在室温～60℃ 调节。水浴 47℃ ±2℃，能放 500 mL 瓶。
螺口玻璃瓶 500 mL。培养管 16 mm × 125 mm 具塞。高压灭菌器能竖放 500 mL 瓶。菌落计数器（手动或自动）。预倒平板则可省 7.10–7.13。

分析纯。琼脂生化试剂级。水：GB/T 6682—2008 三级水。
金霉素（氯四环素）水溶液 1 g/L（0.1 g→100 mL），0.2 μm 过滤除菌。
清洁剂：质量分数 1% 聚氧乙烯(20)山梨醇酐单油酸酯（10 mL + 990 mL 水）；0.2 μm 过滤或 121℃ 15 min 灭菌。
HCl 1 mol/L。乳酸水溶液 100 g/L。NaOH 100 g/L。
麦芽浸出液琼脂 MEA：麦芽浸出物 30 g + 蛋白胨 5 g + 琼脂 15 g + 水 1 L；pH 5.4 ±0.2；121℃ ±2℃ 10 min；水浴 47℃ ±2℃。可选每 100 mL 加 1 mL 金霉素；pH 3.5 时加 10 mL 乳酸且不得再加热。倒板厚约 4 mm。
1/4 强度林格氏液：NaCl 2.25 g、KCl 0.105 g、CaCl₂ 0.12 g、NaHCO₃ 0.05 g / 1 L；分装 10 mL，121℃ 15 min。
胰酪胨大豆琼脂 TSA：胰蛋白胨 15 g + 大豆蛋白胨 5 g + NaCl 5 g + 琼脂 15 g / 1 L；121℃ ±2℃ 10 min；pH 7.3 ±0.3，否则弃去重配。板厚约 4 mm。
醇类（乙醇/甲醇/异丙醇）用于现场消毒设备和器皿。

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